分子排阻色谱

凝胶过滤色谱--GFC（使用水溶液或缓冲液作为流动相）和凝胶渗透色谱--GPC（使用有机溶剂作为流动相）分离未知样品，它可以快速提供分子样品的总体组成大小和组成，并快速确定样品是简单的还是复杂的混合物，并提供样品中每种组分的近似分子量。

该分离方法不适用于具有相似分子尺寸组成或分子大小差异仅为10％的组分分析，因为异构体的分离不适合于尺寸排阻色谱法。

1.它主要取决于凝胶孔径与分离组分的分子大小之间的关系，与流动相的性质无直接关系。

2.样品分子和固定相之间没有相互作用。

色谱固定相是一种多孔凝胶，只允许直径小于孔径的组分进入。

这些孔对于溶剂分子而言非常大，因此溶剂分子是自由的。

传播的传播。

样品中的大分子不能进入凝胶孔，完全被排除在外。

它们只能通过多孔凝胶颗粒之间的柱子，并首先通过流动相从柱子中洗脱出来;中等大小的分子可以进入凝胶。

一些适当的孔，但不是较小的孔，被困在柱中，从柱中缓慢洗脱;小分子可以进入凝胶中的大部分孔隙，并且在柱子中更强。

保留物更慢地洗脱;溶解样品的溶剂分子具有最小的分子量，可以进入凝胶的所有孔隙，最后流出柱子，从而实现不同分子尺寸样品的完全分离。

在尺寸排阻色谱中，溶剂分子最终流出色谱柱，这与其他液相色谱方法明显不同。

3.在SEC中，不同大小的分子的分配系数K总是在0和1之间.K = 0表示溶质完全被排除在填料的孔隙之外，这被称为完全排斥，即排斥。

填料的极限; K = 1表示溶质可以完全进入填料的孔隙。

它被称为完全渗透，这是填料的渗透极限。

4.用一定大小的分子洗脱的体积总和，该分子等于流动相的体积和溶质可以渗透到腔中的体积部分。

Ve = Vo + KVp固定相：通过机械强度将凝胶分成软凝胶（葡聚糖凝胶，琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶）;半刚性凝胶（苯乙烯 - 二乙烯基苯共聚）刚性凝胶（高度交联的苯乙烯 - 二乙烯基苯共聚物，多孔球形硅胶，羟基化聚醚多孔微球）。

有机凝胶（均匀凝胶，半均匀凝胶，不均匀凝胶）;无机凝胶（非均匀凝胶）。

流动相凝胶渗透色谱法：常用四氢呋喃三氯乙烷凝胶过滤色谱法：以水为主体，具有不同pH值的各种缓冲溶液，所有溶剂必须是微孔膜或5砂芯，使用前用漏斗过滤。

除此之外，根据待分离化合物的性质，将一些添加剂加入到流动相中以改善保留和分离。

例如，当亲水性有机凝胶用作固定相时，为了消除基质的不希望的吸附和基质的疏水相互作用，通常在流动相中加入少量无机盐以维持流动相。

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离子强度在0.1和0.5之间，减少了副作用。